collagenX(COL-10)免疫荧光试验
通过不同颜色荧光标记不同的靶标,可以直观的观察同一样品细胞内不同结构和蛋白。荧光标记靶标的方法主要包括荧光染料、免疫标记、荧光融合蛋白等——这几种方法均可选择性标记细胞内的结构和蛋白,让您在成像时更轻松地进行观察。细胞生物学采用的很多荧光工具基本上都是荧光基团。这些荧光基团经过不同的方法修饰或结合到不同的分子上,从而具备了某些的功能与特定的细胞器或蛋白结合。通过化学修饰,单个荧光基团可以产生许多变体形式,且每种变体都有不同的特异性。免疫荧光细胞化学技术用于显示和检查细胞或组织内的抗原或半抗原物质。collagenX(COL-10)免疫荧光试验
细胞免疫荧光实验注意事项:非特异性染色:是否灭活内源性过氧化物酶;孵育过程中干片;抗原热修复过度。染色过深:一抗浓度过高;染色试浓度过高或孵育时间过长;染色剂浓度过高或孵育时间过长。通常实验室先固定细胞再进行通透,但若检测抗原是水不溶性蛋白,可先通透再固定,这样可以通过通透去除一些水溶性蛋白,进而可降低免疫荧光背景和非特异性信号;建议设阴性对照组,消除由于抗体非特异性结合而产生的背景染色;选择醛类固定液时,保持其新鲜度,较好现配现用,使用不新鲜的醛类固定液自发荧光背景会升高。collagenX(COL-10)免疫荧光试验免疫荧光技术利用荧光染料标记的抗体与目标分子结合,从而实现可视化检测。
免疫荧光应用范围:其应用范围极其普遍,可以测定内分泌、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肉瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。根据诊断类别,又可分为传染性疾病、内分泌、药物检测、免疫学、血型鉴定等。许多物质都可产生荧光现象,但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。异硫氰酸荧光素为黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4,较大吸收光波长为490495nm,较大发射光波长520530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。
荧光的产生:一此化学物质能从外界吸收并储存能量(如光能、化学能等)而进入激发态,当其从激发态再回复到基态时,过剩的能量可以电磁辐射的形式放射(即发光)。荧光发射的特点是:可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光;而一旦停止供能,发光(荧光)现象也随之在瞬间内消失。可以引起发荧光的能量种类很多,由光激发所引起的荧光称为致荧光。由化学应所引起的称为化学荧光,由X线或阴极射线引起的分别称为X线荧光或阴极射线荧光。荧光免疫技术一般应用致荧光物质进行标记。免疫荧光技术可以用于研究细胞内蛋白质的定位和表达水平。
免疫荧光间接法测抗体实验注意事项:1)荧光染色后一般在1h内完成观察,或于4℃保存4h,时间过长,会使荧光减弱。2)每次试验时,需设置以下三种对照:①阳性对照:阳性血清+荧光标记物②阴性对照:阴性血清+荧光标记物③荧光标记物对照:PBS+荧光标记物3.已知抗原标本片需在操作的各个步骤中,始终保持湿润,避免干燥。4.所滴加的待检抗体标本或荧光标记物,应始终保持在已知抗原标本片上,避免因放置不平使液体流失,从而造成非特异性荧光染色。免疫荧光技术可以用于研究植物病理学和农业生产。COL-2免疫荧光染色
在实际工作中,荧光抗原技术应用较少,因此通常将其称为荧光抗体技术或免疫荧光技术。collagenX(COL-10)免疫荧光试验
细胞免疫荧光实验注意事项:1、建议细胞直接种孔板,采用倒置荧光显微镜拍照,这样可以避免然后挑片时造成划片或细胞片破损以及然后封片可能造成滑片等结果;2、若实验室只有正置荧光显微镜,则需要将细胞植于细胞爬片。建议直接购买处理过的细胞爬片;若只有普通细胞爬片,可以先将爬片于浓酸(浓酸腐蚀性强,注意操作)或 75% 乙醇浸泡过夜,若用酸浸泡过夜,第二天先用自来水小心冲洗掉爬片残留的酸液,若用 75% 乙醇浸泡,则不需要此步骤。然后,用洗洁精搓洗爬片,然后用去离子水清洗爬片。置于烘箱 80 ℃ 烘干,再将爬片置于超净台造紫外消毒后备用。collagenX(COL-10)免疫荧光试验
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